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新冠檢測為何有假陰性?北京疾控中心等發(fā)現(xiàn):或因樣本熱滅活
最后更新: 2020-05-19 07:48:55自2019年底新冠疫情暴發(fā),核酸檢測對患者診斷和疾控管理發(fā)揮了重要作用。然而實際檢測中,卻經(jīng)常有假陰性的情況發(fā)生。假陰性可能會導致病毒攜帶者被漏診,尚無康復的患者誤出院,以及輸血中的一些潛在安全問題。
那么假陰性的原因有哪些?來自中國的研究發(fā)現(xiàn),對檢測樣本的熱滅活,可能是假陰性的一大原因。當?shù)貢r間5月15日,美國臨床化學協(xié)會與牛津大學出版社合作出版的國際領(lǐng)先的臨床實驗室科學期刊Clinical Chemistry刊發(fā)了來自北京疾病預(yù)防控制中心、北京市預(yù)防醫(yī)學研究中心、首都醫(yī)科大學、中國醫(yī)學科學院老年醫(yī)學研究院、中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院和北京醫(yī)院的論文“Potential False-Negative Nucleic Acid Testing Results for Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 from Thermal Inactivation of Samples with Low Viral Loads”。
論文稱:為了安全,國家衛(wèi)健委相關(guān)指南要求在提取樣本核酸前需將樣本置于56℃以上以滅活病毒。但是,熱滅活本身可能會破壞作為單鏈RNA的新冠病毒的核酸完整性,并在RT-PCR測試中出現(xiàn)假陰性。
這項研究的通訊作者為北京市疾控中心傳染病地方病控制所所長、研究員王全意和來自中國醫(yī)學科學院老年醫(yī)學研究院的任思楣。
研究團隊調(diào)查了熱滅活是否會影響病毒核酸檢測的結(jié)果。研究者檢查了熱滅活對SARS-CoV-2定量RT-PCR結(jié)果的影響,特別是對于攜帶低病毒載量的標本的假陰性結(jié)果的比率。研究者還探討了不同樣品類型,樣品保存時間和化學滅活方法對核酸檢測的影響。
目前,中國已有100多家企業(yè)開發(fā)了用于新冠核酸檢測的試劑盒,其中9個已獲得國家藥品監(jiān)督管理局的批準。經(jīng)過國家藥品監(jiān)督管理局批準的試劑盒,在臨床試驗中對確診病例的樣品均顯示出90%以上的高靈敏度。但是,在實際的臨床環(huán)境中,疑似患者的陽性診斷率沒有評估的那么高。許多疑似患者表現(xiàn)出與肺炎一致的典型臨床癥狀或影像學研究,但在RT-PCR測試中未發(fā)現(xiàn)陽性。這就提出了一個問題,是什么導致這些臨床上的假陰性?
國家藥品監(jiān)督管理局批準的試劑盒通常來說質(zhì)量都是非常高的,而操作者也不太可能因為核酸提取和檢測程序不當產(chǎn)生大量假陰性。那么,臨床上收集的樣品類型(比如,是熱滅活還是化學滅活)可能是導致RT-PCR測試性能低于預(yù)期的主要原因之一。
考慮到SARS-CoV-2是單鏈RNA病毒,分離其基因組需要謹慎處理樣品,并保持良好的實驗室操作規(guī)范。SARS-CoV-2具有很強的傳染性,許多實驗室在提取RNA之前,已對樣本進行56-60°C滅活30-60分鐘,以保證操作人員的安全。盡管學術(shù)界懷疑這種預(yù)處理可能會影響低病毒載量樣品中SARS-CoV-2的檢測,但對其影響的定量分析仍然不足。此次研究中,研究者調(diào)查了熱滅活對SARS-CoV-2核酸檢測結(jié)果的定量影響,并評估了由于熱滅活引起的假陰性率。研究者進一步研究了不同樣品類型,樣品保存時間和化學滅活方法對核酸檢測的影響。
該研究顯示,從確診的COVID-19患者的標本經(jīng)過熱孵育后,在RT-PCR測試時Ct值較熱滅活前的樣板升高(編注:Ct值與病毒載量成反比,Ct值升高,意味著測試出的病毒載量偏低)。此外,在至少一項平行測試中,加熱滅活后的的弱陽性樣品中約一半(15個樣品中的7個,占46.7%)成為RT-PCR陰性。研究者發(fā)現(xiàn),與熱滅活相比,使用胍鹽裂解法保存這些樣品對RT-PCR結(jié)果的影響較小,假陰性更少(15個樣品中的2個,占13.3%),Ct值的增加也明顯更少。
本研究采用的樣本來自北京23名已確診的新冠患者。研究收集了19個咽拭子,2個痰樣本和2個糞便樣本。將4支咽拭子和痰標本保存在3 μmL標準病毒運輸液(VTM)中。其他15支弱陽性喉拭子保存在3 μmL標準病毒運輸液或者3 μmL的化學滅活的緩沖液中。糞便樣本保存在采樣管中。所有樣品都保持在4°C并在4小時內(nèi)轉(zhuǎn)移到實驗室。
研究發(fā)現(xiàn)熱滅活可以導致RT-PCR檢測中病毒核酸的可檢測量減少和Ct值增加(Ct值與病毒載量成反比),這一結(jié)果與最近的豬流行性腹瀉病毒模型的研究結(jié)果一致。熱滅活對攜帶高病毒載量的標本的定性結(jié)果沒有顯著影響。但是,對于弱陽性樣本(Ct值范圍為33.37至36.89),熱滅活可能是實驗室檢測SARS-CoV-2時假陰性結(jié)果的可能原因之一。
據(jù)推測,熱失活可能會對早期感染患者的檢測產(chǎn)生潛在影響,導致核酸檢測無法在患者病毒載量尚低時就檢測出來。在研究中,近一半的弱陽性樣本(15個樣本中的7個,占46.7%)顯示假陰性結(jié)果。這7個樣本的平均Ct值(36.25)相當于約700拷貝/ mL,這也可能是熱敏感的可能閾值。
因此,研究者呼吁,迫切需要提高實驗室檢測的準確率。采用化學滅活劑,例如胍鹽類的RNA樣本保存制劑,可以視為避免生物安全風險的替代方法。研究結(jié)果表明,與低病毒載量樣品中的熱滅活相比,這些滅活劑可能有更好的測定性能和檢測率。但是,化學滅活劑的狹窄適用性,有限的可獲得性和潛在的環(huán)境污染,限制了它們在SARS-CoV-2測試中的應(yīng)用。
附:實驗結(jié)果
標簽 新冠病毒- 原標題:新冠檢測為何有假陰性?北京疾控中心等發(fā)現(xiàn):或因樣本熱滅活
- 責任編輯: 于文凱 
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